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Atualmente, cada vez são mais os setores da indústria nos quais é necessária a ampliação óptica dos objetos, tanto no controle de qualidade quanto no controle de produção. O microscópio é uma ferramenta ideal para isso, pois está disponível em diferentes tipos e variantes e você pode selecionar o que melhor se adequa à sua aplicação.
Existem os tipos clássicos de microscópio, como o monocular e binocular, nos quais observa-se através de uma ocular (microscópio monocular) ou de duas oculares (microscópio binocular). No entanto, nesses dispositivos cada usuário deve ajustar a óptica aos seus parâmetros visuais. O microscópio trinocular possui uma terceira óptica para conectar uma câmera digital ou uma câmera fotográfica. Isso permite ao usuário documentar a inspeção dos objetos adicionalmente com imagens ou usar a referida câmera para transferir as imagens do microscópio para uma tela digital ou para um computador para que outros funcionários também possam visualizá-la.
No entanto, está estabelecendo-se cada vez mais na indústria um novo modelo de microscópio digital. Esse tipo de microscópio, em vez de permitir que o usuário observe através das oculares, mostra a imagem diretamente em uma tela digital. Isso facilita o trabalho em equipe, permitindo que as decisões sejam tomadas com mais eficiência e também simplifica o processamento digital das imagens visualizadas. Dependendo das características do microscópio, as imagens e os vídeos podem ser armazenados em um meio removível, como um cartão de memória ou diretamente em um computador através de uma conexão USB. Enquanto isso, também é possível realizar medições utilizando o software apropriado; dados poderá utilizar para protocolos internos. Isso resulta especialmente útil no controle de qualidade, pois é possível descartar produtos defeituosos e, assim, garantir a qualidade desejada.
Para selecionar o microscópio adequado, primeiro defina as ampliações necessárias para examinar seus objetos. Outro fator a ser considerado na seleção do microscópio, é que o tamanho da amostra, a distância de trabalho e as lentes objetivas estão diretamente relacionados entre si. Isso significa que quanto maior for a ampliação das lentes objetivas, menor a distância de trabalho, o que implica que as dimensões da amostra estão relacionadas à distancia de trabalho do microscópio. Para obter imagens nítidas com uma resolução ideal, é importante que a iluminação seja homogênea, o que pode ser garantida com as lâmpadas halogenas ou LED de série integradas no microscópio. Se em alguma ocasião isso não for suficiente, pode aumentar a iluminação através de fontes de luz externas, como uma lâmpada anular ou uma lâmpada com braço flexível (pescoço de ganso). Como mencionado anteriormente, a visualização ampliada pode ser reproduzida de diferentes maneiras: visualização direta na tela, armazenamento de dados (imagens e vídeos) em um meio de armazenamento ou diretamente em um computador.
A maioria dos microscópios não permite o controle óptico de amostras dentro dos processos de produção devido à sua construção. Nesses casos, utiliza-se um microscópio USB posicionado diretamente sobre a amostra e conectado à entrada USB de um computador. Graças ao tamanho compacto deste tipo de microscópio, é possível realizar inspeções nesse tipo de situações. Existem anéis espaçadores transparentes que ajudam a posicionar o microscópio corretamente nesses casos. Também é possível colocar o microscópio em um tripé ou suporte, o que permite ao usuário ter as duas mãos livres para trabalhar.
Caso uma visualização 2D não seja suficiente, um microscópio 3D permitirá que você tenha uma forma de visualização completamente nova. Este microscópio obtém uma vista panorâmica de 360° da amostra, apenas com um ângulo de 45°. Esta inovadora visão é muito prática, especialmente em testes de componentes, para detectar e documentar erros e danos.
O uso de luz monocromática com um comprimento de onda curto em um microscópio oferece uma resolução mais alta. Na faixa UV, é alcançada uma resolução especialmente alta, pois, por um lado, o curto comprimento de onda da luz UV produz uma alta resolução e, por outro lado, a luz UV é absorvida pela amostra (por exemplo, proteínas e aminoácidos). Dessa forma, também é obtido mais contraste do que com outros comprimentos de onda. Organelas e pequenas estruturas são claramente visíveis sob o microscópio mesmo sem procedimentos adicionais de contraste.
Com um microscópio podemos ver e observar objetos e materiais em grande detalhe. Por exemplo, em um microscópio com uma tela, podemos observar e estudar objetos bem pequenos e plantas ou insetos. O microscópio é uma ferramenta essencial em biologia, medicina e ciência dos materiais.
As ampliações são o produto da multiplicação do aumento da lente objetiva com o aumento da ocular do microscópio. Por exemplo, um microscópio com zoom estéreo com ampliação de 12,5 na ocular e um zoom na lente objetiva com ampliação de 0,8 a 4,0 produz uma ampliação total de 10 a 50 aumentos.
A maioria dos modelos de microscópio estéreo, oferece um ajuste variável e contínuo da ampliação com um anel estriado na parte externa.
O ideal é que exista um espaço livre entre o material a ser observado e a lente objetiva do microscópio. Em geral, o ideal é que haja entre 80 e 120 milímetros, dependendo do modelo. Existe um modelo chamado microscópio especial de trabalho que oferece uma distância entre 200 e 250 milímetros. O normal em uma boa óptica está entre 20 e 25 milímetros com uma ampliação de 10x.
O campo de visão é o diâmetro da imagem que podemos ver com o microscópio com uma ampliação, por exemplo, de 10x. Esta é uma característica que determina a qualidade de cada óptica do microscópio e pode ser verificada mesmo por pessoal não especializado. Como regra geral, quanto menor a ampliação, maior o diâmetro do campo de visão.
A profundidade de campo é o intervalo de distância que existe na frente e atrás do plano focal no qual a imagem é mostrada "nítida". Enquanto a profundidade de campo depende de diferentes fatores, a ampliação do microscópio desempenha um papel importante na determinação do tamanho deste intervalo de distância. Geralmente, quanto maior for a ampliação, menor é a profundidade de campo. A função de composição da imagem, desempenha um papel importante na microscopia, e o microscópio digital possibilita uma geração de imagens nítidas em toda a superfície, tornando-o claramente mais eficiente.
Abaixo da platina do microscópioestá o condensador, que consiste em um sistema de lentes e um diafragma de íris, o diafragma de abertura. A função desse diafragma no procedimento de luz normal, é a preparação ideal da luz do microscópio para a lente objetiva correspondente. Se o diafragma do microscópio abrir, a resolução aumentará com o contraste decrescente. Ao fechá-lo poderá observar como, pelo contrário, a resolução diminui com uma ampliação simultânea do contraste. A função de abertura do diafragma consiste portanto em buscar um compromisso ideal entre a resolução e o contraste para a mostra correspondente. No caso de um microscópio de contraste de fase ou de campo escuro, a abertura do diafragma não tem nenhuma função e, é por isso que neste procedimento de contraste ele abre completamente para evitar avarias.
Para que seja mais fácil encontrar novamente a amostra após alterar o aumento da lente objetiva do microscópio, coloque-a no centro da imagem. Modifique a ampliação da objetiva do microscópio movendo o revólver. Normalmente, a nova imagem geralmente é exibida com nitidez, mas se não for assim, você pode ajustar a focagem usando o ajuste micrométrico do microscópio. Siga o mesmo procedimento para continuar subindo os aumentos.
Ao trabalhar com grandes ampliações, o diafragma do microscópio não deve estar muito fechado, porque isso pode produzir a aparição de linhas duplas e que a imagem não seja nítida. Caso isso aconteça, é possível solucionar abrindo um pouco mais o diafragma. Mas se ocorrer o contrário, ou seja, que o diafragma estivesse aberto ao máximo, a imagem poderia ser exibida de forma muito débil ou até mesmo ao ponto de não ser possível reconhecer quase nada. Nesse caso, deve fechar um pouco o diafragma. E, se após efetuar um correto ajuste continuar vendo uma imagem débil, provavelmente o problema seja que a ocular ou a lente objetiva do microscópio esteja suja. Nesse caso, deve limpar as lentes do microscópio.
Para obter uma nitidez ideal, feche o diafragma do microscópio aproximadamente até a metade e mova lentamente com a ajuda do mecanismo de enfoque macro, a objetiva menor do microscópio sobre a amostra enquanto observa pela ocular. Quando for possível reconhecer as células através da lente objetiva do microscópio, ajuste a nitidez da imagem com precisão com o mecanismo de enfoque micro. Ajuste também a clareza da imagem com o botão de ajuste para iluminação até obter uma intensidade de luz adequada para você. Se o seu microscópio não tiver iluminação ajustável e a imagem estiver muito clara, feche um pouco mais o diafragma e abra-o se, pelo contrário, a imagem estiver muito escura.
Em nosso canal no YouTube você pode encontrar um vídeo sobre o microscópio PCE-MM 200. Este vídeo mostra como é fácil observar as superfícies com um microscópio USB para PC. O microscópio USB mostra objetos em tempo real com até 200 ampliações na tela do PC. Isso proporciona imagens brilhantes obtidas através dos 8 LEDs incorporados que iluminam de todos os ângulos e além disso, é possível regular a luz de forma contínua. Você pode utilizar este microscópio, por exemplo, no campo da educação, para que as crianças observem detalhes não visíveis em plantas, objetos pequenos ou miniaturas. Também é possível utilizar este microscópio USB como uma ajuda para os colecionistas de moedas ou selos. O software oferece múltiplas aplicações, que permitem ajustar o microscópio com um pequeno padrão em milímetros e polegadas. Isso permite medir distâncias de uma forma prática no seu PC. Poderá encontrar mais informações sobre o microscópio USB aqui neste relatório.
As aplicações de um microscópio, seja um microscópio analógico ou digital, são praticamente ilimitadas.
Ao usar o microscópio, geralmente ocorrem dois erros determinantes:
Na eletrônica, o microscópio é usado para uma ampla variedade de aplicações. Os microscópios digitais estacionários são usados para o controle de qualidade da produção e da montagem de placas. Comparados aos microscópios de luz, têm a vantagem de oferecer melhores possibilidades de orientação ao usuário, o que permite inspecionar a placa segmento a segmento. A inspeção pode ser visualizada diretamente em um display grande e, graças às opções de armazenamento, normalmente em um cartão SD, também pode ser documentada. Dependendo do tipo de microscópio, é possível armazenar fotos e em alguns outros também vídeos. As placas são verificadas para detectar curtos-circuitos e interrupções de pista. O microscópio serve também para comparar os contornos das trajetórias dos condutores com a especificação do padrão. Pode verificar a continuidade e os resíduos dos buracos e vias.
A laca resistente à solda é submetida a uma inspeção óptica com o microscópio para garantir que se espalhe uniformemente e forme manchas. Uma vez aprovado, as placas são limpas e montadas, também são examinadas novamente com o microscópio. No caso de circuitos integrados com um pequeno espaçamento entre pinos, primeiro é verificado se os pinos estão na superfície de contato correspondente e se foram formados curtos-circuitos nos pinos do banho de solda. No caso dos componentes de montagem superficial (SMD, do inglês Surface Mount Device), o microscópio é usado para verificar os componentes corretos, uma vez que a inscrição do mesmo não pode ser vista a olho nu.
Obviamente, as uniões de solda também são examinadas para ver se existem roturas de solda e as chamadas uniões de solda fria. As uniões de solda fria não têm conexão entre a solda e o correspondente pino de conexão do componente. A detecção das uniões soldadas a frio geralmente é muito difícil porque são difíceis de ver. Sem o uso de um microscópio raramente é possível detectar. A detecção de uniões soldadas a frio é muito importante porque muitas vezes são a origem de uniões eletrônicas que já não são funcionais ou são apenas parcialmente funcionais.
O microscópio também é usado na manutenção e reparação de conjuntos eletrônicos. No entanto, como muitas vezes é difícil desmontar a placa, o que respectivamente seria bom evitá-lo, normalmente é usado um microscópio digital que seja portátil e pequeno. Ele pode ter conexão USB para o monitor do PC servir como display, ou integrar diretamente um display ao microscópio. Como na produção, verifica-se também se as placas não têm uniões de soldas partidas e frias ou possíveis curtos-circuitos ou interrupções involuntárias na trajetória do condutor que tenham sido produzidas durante o uso. Além disso, os componentes são examinados para detectar possíveis rachaduras ou deformações térmicas.
Um requisito para obter imagens nítidas é que a óptica do microscópio esteja limpa. O maior problema é a poeira. Por um lado, as partículas de poeira dificultam a visualização da imagem com o microscópio, e por outro lado, arranham a superfície de vidro e danificam a engrenagem e a superfície de deslizamento do microscópio. Assim, proteger o microscópio da poeira é uma das medidas mais importantes para evitar danos. Portanto, é importante cobrir o microscópio com uma capa suave e fácil de lavar após cada uso, e lavá-la regularmente para evitar que a poeira penetre no microscópio. É importante que as aberturas no porta-prismas também estejam sempre tampadas. É importante diferenciar o tipo de sujeira na hora de limpar os componentes ópticos do microscópio: partículas de poeira (resíduos de vidro de lamelas, restos de têxteis, etc.) e sujeiras em geral (impressões digitais, etc.).
Atualmente, um microscópio moderno pode estar formado de vários componentes. Na seguinte imagem estão enumeradas as partes mais importantes do microscópio. O microscópio com câmera geralmente possui uma tela em vez de uma ocular.
O pé é a base do microscópio, na qual estão estruturados os outros componentes. O suporte do tubo é uma coluna, na qual é fixada a óptica e a platina. O tubo está quase sempre posicionado de forma oblíqua, raramente na vertical, na parte superior do microscópio. O suporte de trabalho, que possui um orifício no centro, denomina-se platina. Para o ajuste da nitidez, o microscópio normalmente possui duas rodas, a roda de ajuste macrométrico e de ajuste micrométrico. Todos os outros componentes do microscópio usados para iluminação e ampliação sobre a amostra, formam parte da óptica. A observação é feita olhando através da ocular, localizada na extremidade do tubo. Sobre a amostra estão as lentes objetivas, fixadas ao revolver, que serve para alterá-las instantaneamente. Abaixo da platina do microscópio, há um sistema de lentes chamado condensador. Para iluminar as amostras, é usada a fonte de luz ou um espelho.
Um microscópio estéreo é usado principalmente para observar as características internas de um objeto. O uso da óptica estérea, permite que nossos olhos vejam a imagem do mesmo objeto de dois ângulos diferentes. Isso cria uma impressão tridimensional, ou seja, uma impressão espacial.
Atualmente no mercado existem diferentes tipos de microscópios.
Requisitos básicos do seu microscópio
Dependendo do uso que será dado ao seu microscópio, será preciso que o mesmo cumpra certos requisitos. Um microscópio normal com 400x ou 600x e iluminação, costuma ser suficiente para o uso básico. Um microscópio com iluminação especial, como contraste de fase, de campo escuro ou com uma iluminação halogena potente, permite um reconhecimento detalhado dos objetos, sem a necessidade de pintar a amostra.
Este tipo de microscópio é usado principalmente para visualizar objetos de maior tamanho. Os campos em que normalmente são usados são, por exemplo, em análises de insetos, plantas, moedas ou verificação de materiais. Este microscópio de luz refletida geralmente tem uma distância de trabalho de mais de 40 mm, por isso é ideal para trabalhar com objetos grandes ou para verificar materiais, e normalmente este microscópio é oferecido como binocular.
A microscopia digital é o oposto da microscopia convencional. Os testes não são analisados diretamente através da ocular do microscópio, mas são apresentados em um display com a resolução desejada, como uma imagem completa e virtual após serem totalmente digitalizados. O foco automático integrado na objetiva do microscópio garante que a imagem esteja sempre bem focada e, portanto, nítida e clara. As imagens individuais produzidas pela digitalização são automaticamente sobrepostas para produzir uma imagem final completa. Esta imagem final virtual pode ser gravada em um banco de dados.
Este microscópio é usado principalmente para observar preparações translúcidas e líquidos, como em análises de sangue, testes em plantas, etc. Um microscópio de luz transmitida típico, tem uma distância de trabalho muito curta, abaixo de 4 mm, portanto este tipo de microscópio é adequado apenas para amostras muito finas. As amostras são colocadas sobre uma lâmina e cobertas com a tampa para amostras. Por outro lado, o microscópio de luz transmitida geralmente equipa as objetivas com muitos aumentos (de 40x a até mais de 1000x). Em trabalhos com 1.000 ampliações ou mais, é necessário colocar uma gota de óleo de imersão para fechar o espaço de ar existente entre a lamela e a lente objetiva, para obter uma nitidez útil. As imagens de até 400 ampliações podem ser visualizadas praticamente qualquer microscópio, sem a necessidade de técnicas especiais, como a anterior. Com a alteração das oculares, podem ser incrementadas as ampliações do microscópio de luz transmitida.
O microscópio eletrônico está, em termos de qualidade, por cima de um microscópio típico de luz visível (fótons) para formar imagens de objetos pequenos. Este tipo de microscópio aumenta a velocidade dos elétrons para obter um comprimento de onda mais curto e conseguir uma resolução maior (já que os elétrons têm um comprimento de onda muito mais curto que a luz visível, e portanto podem desintegrar estruturas menores), conseguindo assim uma capacidade de ampliação de até 500.000 aumentos, muito maior se comparamos com outros tipos de microscópios ópticos. As imagens originais obtidas são em preto e branco porque são usados elétrons em vez de luz. O feixe eletrônico é produzido por cátodo de volfrâmio. Existem dois tipos de microscópio que funcionam de acordo com este princípio: Microscópio eletrônico de transmissão e Microscópio eletrônico de varredura.
O microscópio eletrônico está, em termos de qualidade, por cima de um microscópio típico de luz visível (fótons) para formar imagens de objetos pequenos. Este tipo de microscópio aumenta a velocidade dos elétrons para obter um comprimento de onda mais curto e conseguir uma resolução maior (já que os elétrons têm um comprimento de onda muito mais curto que a luz visível, e portanto podem desintegrar estruturas menores), conseguindo assim uma capacidade de ampliação de até 500.000 aumentos, muito maior se comparamos com outros tipos de microscópios ópticos. As imagens originais obtidas são em preto e branco porque são usados elétrons em vez de luz. O feixe eletrônico é produzido por cátodo de volfrâmio. Existem dois tipos de microscópio que funcionam de acordo com este princípio: Microscópio eletrônico de transmissão e Microscópio eletrônico de varredura.
Variantes da microscopia eletrônica:
O microscópio monocular é o mais econômico e adequado para iniciar-se no mundo da microscopia. Com o microscópio monocular não perde visibilidade, pois utiliza uma única lente objetiva. Para uma visualização prolongada e mais descontraída é conveniente trabalhar com o microscópio binocular. Ao usar ambos os olhos, a visão fica mais descansada durante um período prolongado de tempo. O microscópio binocular possui, além de elementos padronizados, uma distribuição de prismas mais complexa e uma iluminação mais potente. Para aplicações que exigem armazenar imagens, existe o microscópio trinocular. Trata-se de um microscópio binocular com um terceiro tubo adicional. O mesmo permite conectar uma câmera com conexão USB (também chamada micro ocular) que registra as imagens. As imagens registradas podem ser transferidas para um computador. Também tem a possibilidade de conectar uma micro ocular ao microscópio binocular, simplesmente colocando-a em uma das duas oculares do microscópio. A micro ocular oferece a possibilidade de transformar de forma econômica o microscópio analógico em um microscópio digital.
Na microscopia de raios X, os raios X são usados como fonte de radiação. Devido ao menor comprimento de onda dos raios X, a resolução é muito maior que a da luz. Também podem ser medidas outras interações (capacidade de penetração) da amostra com os raios X. Uma grande vantagem da microscopia de raios X é que as amostras podem ser mais grossas do que com a microscopia eletrônica. Além disso, a condutividade elétrica da superfície não é necessária, o material biológico não precisa ser colorido, incrustado em um material portador ou cortado em amostras extremamente finas.
Este tipo de microscópio é uma forma especial de microscopia de luz ou fluorescência: seções ópticas muito finas são "digitalizadas" e montadas em uma imagem 3D. Como todas as seções são opticamente nítidas, é criada uma imagem 3D totalmente enfocada.
Para aplicações que precisam ser capturadas de imagens, também existem microscópios trinoculares ou microscópios de câmera. Estes são microscópios binoculares com um tubo adicional. Aqui, uma câmera USB pode ser conectada durante a observação, para registrar as observações. As imagens gravadas podem ser transferidas para um PC ou laptop. Além disso, existe a possibilidade de conectar uma micro ocular aos microscópios binoculares. Esta micro ocular simplesmente se encaixa na armação da ocular do microscópio. A micro ocular oferece a possibilidade de atualizar seus microscópios atuais para um microscópio de vídeo ou um microscópio de câmera a um preço razoável e, assim, atualizá-los ao estado atual da técnica.
Fluorescência
fluorescência secundária, os objetos que não são fluorescentes são rotulados com um corante fluorescente. Um corante fluorescente conhecido é, por exemplo, a laranja acridina, com o qual os núcleos celulares (cromatina e nucléolo) mostram uma fluorescência verde com a excitação com luz azul. Como a fluorescência ocorre apenas com a aplicação do corante fluorescente, neste caso, fala-se em fluorescência induzida.
A imunofluorescência é uma técnica na qual é unido um corante fluorescente (geralmente FITC = Isotiocianato de fluoresceína) com um anticorpo. Esses anticorpos podem ser produzidos muito especificamente para determinadas estruturas biológicas. A união do fluorocromo ocorre graças ao anticorpo. Estas fluorocromações são extremamente seletivas, no entanto, não são tão intensivas quanto na fluorescência secundária tradicional.